【主要組成成份】
由單克隆IgM抗體及含有高分子增效劑的緩沖溶液組成的。試劑含有0.1%(w/v)的疊氮鈉和牛血清白蛋白。
【儲存條件及有效期】
2~8℃避光密封保存,避免高溫或反復(fù)凍融。有效期自檢定合格之日起12個月。
【適用儀器】
血型血清學(xué)離心機(jī)。
【樣本要求】
(1) 不適合嚴(yán)重脂血、溶血的樣本。
(2) 自身免疫性溶血性貧血患者必須排除自身凝集后,才能準(zhǔn)確定型。
(3) 有纖維蛋白存在的情況下應(yīng)除去纖維蛋白。
【檢驗方法】
抗A1、抗H (試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加50μl(1滴)抗A1或抗H試劑。
(3) 添加50μl(1滴)待測紅細(xì)胞懸浮液。
(4) 混勻,室溫孵育5分鐘。
(5) 3000rpm離心20秒。
(6) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
抗C、抗c、抗E、抗e、抗K(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加50μl(1滴)抗c或抗C或抗e或抗E或抗K試劑。
(3) 添加50μl(1滴)3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(4) 混合,并在3000rpm離心20秒。
(5) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
(6) 陰性或弱陽性測試應(yīng)在37℃孵育5分鐘后重復(fù)步驟4和5后觀察結(jié)果,以提高紅細(xì)胞罕有表型的反應(yīng)強(qiáng)度。
抗P1(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加100μl(2滴)待測紅細(xì)胞懸浮液。
(3) 添加100μl(2滴)抗P1試劑。
(4) 3000rpm離心20秒。
(5) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
抗S(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%受檢紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加50μl(1滴)抗S試劑。
(3) 添加50μl(1滴)待測紅細(xì)胞懸浮液。
(4) 混合,并在3000rpm離心20秒。
(5) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
(6) 所有陰性或弱陽性測試應(yīng)都在室溫下孵育5分鐘,重復(fù)4和5階段,以提高紅細(xì)胞罕有表型的反應(yīng)強(qiáng)度。
抗s(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加2滴測試的懸浮紅細(xì)胞。
(3) 添加100μl(2滴)抗s試劑。
(4) 3000rpm離心20秒。
(5) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
抗Lea或抗Leb試劑(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加100μl(2滴)抗Lea或抗Leb試劑。
(3) 添加50μl(1滴)受檢紅細(xì)胞懸浮液。
(4) 混合,并在室溫下孵育15分鐘。
(5) 3000rpm離心20秒。
(6) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
抗Jka或抗Jkb試劑(試管法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在做好標(biāo)記的試管中添加50μl(1滴)抗Jka或抗Jkb試劑。
(3) 添加50μl(1滴)待測紅細(xì)胞懸浮液。
(4) 混合,并在37℃下孵育5分鐘。
(5) 在3000rpm離心20秒。
(6) 輕輕搖動試管使紅細(xì)胞重懸并肉眼觀察凝集結(jié)果。
(7) 所有弱陽性、陰性測試都在37℃下孵育10分鐘,重復(fù)4和5步驟。這可能會提高紅細(xì)胞罕有表型的反應(yīng)強(qiáng)度。
抗C、抗c、抗E、抗e、抗K、抗S(微孔板法)
(1) 用生理鹽水配制3~5%待測紅細(xì)胞懸浮液。
(2) 在一個標(biāo)準(zhǔn)的U型微孔板測試孔中添加50μl(1滴)抗C或抗c或抗E或抗e或抗K或抗S試劑。
(3) 將50μl(1滴)待測紅細(xì)胞懸浮液添加到相應(yīng)的測試孔中。
(4) 手動或搖床混合孔中內(nèi)容物。
(5) 在室溫下孵育15~20分鐘。
(6) 微孔板在3000rpm離心40秒。
(7) 懸浮紅細(xì)胞使用微孔板搖床(如步驟4)。
(8) 觀察測試結(jié)果并記錄。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1. 陽性結(jié)果:紅細(xì)胞凝集,為陽性結(jié)果。
2. 陰性結(jié)果:紅細(xì)胞不凝集,為陰性結(jié)果。
【檢驗方法的局限性】
1. 直接抗球蛋白試驗(DAT)陽性的紅細(xì)胞,可能會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
2. 酶處理的紅細(xì)胞可能會與抗體試劑發(fā)生假陽性反應(yīng)。不新鮮的血液樣本測試時可能獲得較弱的反應(yīng)。
3. 試品污染或任何技術(shù)偏差,可能會出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。
【注意事項】
1. 所有血液產(chǎn)品應(yīng)被視為具有潛在傳染性。用于生產(chǎn)這種試劑的人類捐助或細(xì)胞株已經(jīng)過測試,并發(fā)現(xiàn)對抗HIV,抗HCV,乙肝表面抗原,EB病毒和鼠抗體(MAP)陰性反應(yīng)。沒有已知的測試可以保證產(chǎn)品從人體血液中產(chǎn)生不攜帶任何傳染性病原體。在使用該產(chǎn)品時注意防護(hù)。
2. 試劑含有0.1%(w/v)的疊氮鈉。疊氮鈉吸入體內(nèi)有毒,切勿攝入。疊氮鈉能與含鉛或銅的管道發(fā)生反應(yīng)而生成易爆的金屬疊氮化物,處理時用大量清水沖洗。
3. 該試劑為澄清液體,渾濁可能表明細(xì)菌污染。該試劑如果有沉淀物,纖維蛋白膠或顆粒存在不得使用。
4. 該試劑僅供科研使用,不用于體外診斷。
5. 該試劑所用的牛血清白蛋白沒有傳播性海綿狀腦?。═SEs)。
6. 廢棄物可使用適當(dāng)濃度的消毒劑浸泡過夜或高壓滅菌處理。
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